العملية الأساسية للكشف عن PCR من فيروس كورونا الجديد
1. جمع العينات: جمع متزامن للجهاز التنفسي العلوي (بما في ذلك البلعوم الأنفي والبلعوم الفموي) والجهاز التنفسي السفلي (بما في ذلك البلغم أو شفط القصبة الهوائية أو سائل غسل الشعب الهوائية) للكشف عن فيروس كورونا المستجد بواسطة RT-PCR. عندما تكون عينات الجهاز التنفسي السفلي متاحة بسهولة: استخدم معدات الوقاية الشخصية المناسبة لجمع العينات (لاحظ عينات URT لاحتياطات القطيرات والتعرض وعينات LRT للاحتياطات المحمولة جوا) عند جمع عينات URT ، استخدم مسحات أخذ عينات الفيروس (استر البولي المعقم أو الرايون بدلا من القطن) ووسط نقل الفيروسات. لا تأخذ عينات من الخياشيم أو اللوزتين. بالنسبة للمرضى المشتبه في إصابتهم بفيروس كورونا المستجد ، وخاصة الالتهاب الرئوي أو المرضى الشديدين ، لا يمكن لعينة واحدة من URT استبعاد التشخيص ، ويوصى بزيادة عينات URT و LRT.
2. استخراج الحمض النووي: أداة استخراج الحمض النووي أو استخراج الحمض النووي اليدوي
1) ، لا حاجة للأدوات ، واستخدام الاستخراج اليدوي
المعدات والمواد الاستهلاكية المختبرية اللازمة لاستخراج الأحماض النووية وعزل العينات:
خزائن السلامة البيولوجية (الوظائف: فصل العينات ، وتوفير الموظفين ، والعينات وحماية البيئة) ،
جهاز طرد مركزي مبرد عالي السرعة لسطح المكتب (الوظيفة: سرعة ≥ 12000 دورة في الدقيقة ، تحليل الأحماض النووية ، إلخ) ،
ثلاجة منخفضة الحرارة (وظيفة: تخزين الكاشف) ،
حمام معدني ، ماصة (وظيفة: جرعات دقيقة) ،
أنابيب الطرد المركزي المعقمة (وظيفة: فصل الأحماض النووية ، وما إلى ذلك) ،
قفازات اللاتكس (وظيفة: مكافحة التلوث) ،
الإيثانول المطلق ، الأيزوبروبانول ، DNase و RNase المياه الحرة (المياه غير المعالجة مع DEPC).
3. التلقائي استخراج الحمض النووي أداة: (استخراج التلقائي، 32 عينة يمكن استخراجها مرة واحدة في 26 دقيقة)
يتم تحميل اللوحة المثبتة مسبقا المطابقة مباشرة واستخراجها مباشرة على الجهاز:
4. الكشف الكمي عن تفاعل البوليميراز المتسلسل التألق:
المعدات والمواد الاستهلاكية المطلوبة: خزانة السلامة البيولوجية (الوظيفة: إعداد العينات ، وتوفير الموظفين ، والعينات وحماية البيئة) ،
أداة PCR الكمية الفلورية (الوظيفة: الكشف عن تضخيم PCR وتحليله) ،
جهاز طرد مركزي مبرد عالي السرعة لسطح المكتب (الوظيفة: السرعة ≥ 12000 دورة في الدقيقة) ،
فريزر بدرجة حرارة منخفضة (تخزين العينات عند -86 درجة مئوية ، تخزين الكواشف عند -20 درجة مئوية و 4 درجات مئوية) ،
مذبذب، (مزيج)
أطراف ماصة متدرجة (وظيفة: تحميل دقيق) ، حجم 1-10ul
أنابيب الطرد المركزي المعقمة (0.5 / 1.5 / 2 مل) ،
0.2ml الصف البصري أنبوب PCR / لوحة (وظيفة: أنبوب تفاعل PCR) ،
قفازات اللاتكس (وظيفة: مكافحة التلوث).
يخضع استخراج الحمض النووي وتكوين نظام التفاعل وتفسير النتائج لتعليمات المجموعة.
