تشبه تقنية PCR عملية التكرار الطبيعي للحمض النووي ، وتعتمد خصوصيتها على أوليغونوكليوتيدات أوليغونوكليوتيد مكملة لطرفي التسلسل المستهدف. يتكون PCR من ثلاث خطوات تفاعل أساسية: تمسخ ، تلدين ، وتمديد. تتم عملية التفاعل هذه في حاوية تفاعل PCR. مع التطوير المستمر لأداة تضخيم الجينات ، شهدت حاوية التفاعل أيضا التطور التدريجي لأنبوب جهاز الطرد المركزي من 1.5 مل إلى 0.2 مل (0.25 مل) إلى 0.2 مل رقيقة الجدران مخصصة لتفاعل البوليميراز المتسلسل. ، أنبوب 0.1mlpcr. مع الزيادة في عدد تفاعلات تضخيم PCR ، يتم تشكيل حاويات تضخيم الجينات عالية الإنتاجية لشرائط PCR وألواح PCR تدريجيا.
يتكون PCR من ثلاث خطوات تفاعل أساسية: تمسخ - تلدين - تمديد
نزع الحمض النووي للقالب:
بعد تسخين الحمض النووي للقالب إلى حوالي 94 درجة مئوية لفترة معينة من الزمن ، يتم فصل الحمض النووي المزدوج الذي تقطعت به السبل من الحمض النووي للقالب أو الحمض النووي المزدوج الذي تقطعت به السبل الذي شكله تضخيم PCR ، بحيث يمكن دمجه مع التمهيدي للتحضير للجولة التالية من التفاعل.
التلدين (إعادة تشبع) الحمض النووي قالب مع الاشعال :
بعد تشويه الحمض النووي للقالب إلى حبلا واحدا عن طريق التسخين ، ويتم خفض درجة الحرارة إلى حوالي 55 درجة مئوية ، يتم إقران الاشعال بالتسلسل التكميلي للشريط الفردي للحمض النووي للقالب.
تمديد الاشعال :
تحت تأثير Taq ، يستخدم اقتران قالب الحمض النووي التمهيدي dNTP كمادة خام للتفاعل لتوليف سلسلة تكرار جديدة شبه محجوزة مكملة لسلسلة الحمض النووي للقالب وفقا لمبدأ الاقتران الأساسي والنسخ المتماثل شبه المحجوز.
المبادئ الأساسية لتكنولوجيا PCR
تعتمد التكنولوجيا على تفاعل تخليقي إنزيمي لبوليميراز الحمض النووي في وجود الحمض النووي القالب والاشعال وأربعة ديوكسي ريبونوكليوتيدات.
يستخدم بوليميراز الحمض النووي الحمض النووي الأحادي الخيط كقالب لبدء التوليف باستخدام قطعة صغيرة من الحمض النووي المزدوج العالق. يتم الجمع بين واحد أو اثنين من أوليغونوكليوتيد الاصطناعية الاشعال مع تسلسل تكميلي في قالب الحمض النووي واحد تقطعت بهم السبل لتشكيل الحمض النووي الجزئي المزدوج تقطعت بهم السبل.
في ظل درجة حرارة وبيئة مناسبتين ، يضيف بوليميراز الحمض النووي deoxymononucleotide إلى نهاية 3'-OH من التمهيدي ، ويستخدم هذا كنقطة انطلاق للامتداد على طول اتجاه 5'→3' للقالب لتوليف شريط تكميلي جديد للحمض النووي .
الفرق بين أنابيب PCR وأنابيب أجهزة الطرد المركزي
أنابيب PCR:
لوحة تفاعل PCR هي 96 بئرا أو 384 بئرا ، وهي مصممة خصيصا لتفاعلات الدفعات. المبدأ هو أن إنتاجية جهاز PCR وجهاز التسلسل هي عموما 96 أو 384.
أنبوب الطرد المركزي:
أنبوب جهاز الطرد المركزي ليس بالضرورة أنبوب PCR. هناك أنواع كثيرة من أنابيب الطرد المركزي وفقا لقدرتها. تلك الشائعة الاستخدام هي 1.5 مل ، 2 مل ، 5 مل ، 15 أو 50 مل ، وأصغرها (250 مل) يمكن استخدامها كأنبوب PCR.
كيفية اختيار أنابيب PCR
اخترنا وضع أنابيب PCR على أمل اختيار الموقع الأكثر دقة لدرجة الحرارة.
يجب أن يكون الموضع الأكثر دقة لدرجة الحرارة هو الموضع الموجود فوق مستشعر درجة الحرارة أسفل الوحدة (بغض النظر عن درجة الحرارة غير الدقيقة للمستشعر).
يختلف موضع مستشعر درجة الحرارة لأدوات PCR المختلفة.
على سبيل المثال ، يحتوي AB 2720 على واحد فقط في الوسط ، ويحتوي MJ 200 على ثلاثة أجهزة استشعار ، وهي أسفل اليسار والوسط وأعلى اليمين ، ويجب أن يكون Eppendorf في الصف A أو H ، ويحتوي Dongshenglong 811 على ثلاثة مستشعرات لدرجة الحرارة ، ويجب اختيار B1-2 ، C1-2 ، C6-7 ، D6-7 ، B11-12 ، C11-12 ، لأن هذه النقاط هي نقاط دقيقة في المواعيد.
