اليوم ، لنتحدث عن عنصر أساسي في تجارب تفاعل البوليميراز المتسلسل - المواد الاستهلاكية. بصفتك زائرًا متكررًا لـ PCR ، من الضروري فهم الخصائص والمصطلحات المتعلقة بالمواد الاستهلاكية PCR.
هناك مجموعة متنوعة من المواد الاستهلاكية PCR في السوق ، بما في ذلك العلامات التجارية والمواصفات والألوان وما إلى ذلك ، وهي مبهرة. دعونا نفهمها خطوة بخطوة.
لوحة pcr
1. المواد
عادةً ما تكون المادة الخام للمواد الاستهلاكية PCR هي مادة البولي بروبيلين. إنها مادة خاملة جيدة مقاومة للحرارة. تتراوح درجة حرارة العمل من -30 إلى 140 درجة ، مما يمكنها من تحمل تغيرات الطاقة الحرارية أثناء الدورة الحرارية لتفاعل تفاعل البوليميراز المتسلسل ، وتلعب دورًا جيدًا في إحكام غلق المواد وحمايتها في نظام تفاعل تفاعل البوليميراز المتسلسل.
تعرف على المزيد حول البولي بروبلين
2. اللون
الأنواع الشائعة هي الأنابيب البيضاء وأنابيب PCR الشفافة. في تجارب PCR التقليدية ، لا يوجد فرق بين الاثنين. ومع ذلك ، في نفس تجربة الوقت الحقيقي / qPCR ، كانت الأنابيب البيضاء أكثر حساسية واتساقًا نسبيًا لأدوات qPCR ذات قراءات الإشارة القمية (انظر الشكلين A و B أدناه). لماذا هو هكذا؟
أنبوب pcr
ج: قيم Ct منخفضة للأنابيب البيضاء مقارنة بالأنابيب الشفافة ؛ ب: إمكانية التكرار بشكل أفضل مع الأنابيب البيضاء.
البيانات الأساسية لـ qPCR هي قيمة Ct ، وإشارة التألق هي مصدر البيانات لحساب قيمة Ct ، لذلك من المهم جدًا ما إذا كان يمكن نقل الفلورة في الأنبوب بالكامل إلى الكاشف. جدار الأنبوب الأبيض يمنع الفلورة من المرور عبر جدار الأنبوب والانكسار (الشكل أ أدناه) ، وبالتالي منع التألق من الانتقال إلى كتلة التسخين (أي جدار الفتحة المعدنية حيث يتم وضع الأنبوب) ويتم امتصاصه أو عكسها بشكل غير متسق بواسطة الكتلة. تم جمع إشارة فلورية أقوى وأكثر تركيزًا عند طرف الأنبوب الأبيض مقارنة بالأنبوب الواضح (الشكل ب أدناه).
أنبوب pcr
ج: الاتجاه المتغير لإشارة التألق في الأنبوب الشفاف والأنبوب الأبيض ؛ ب: مقارنة شدة التألق بعد إضافة نفس الكمية من الفلورسين.
لذلك إذا كنت تستخدم آلة qPCR عالية القراءة ، فجرب الأنابيب البيضاء.
3. الجودة (العجاف أو غير الهزيل)
يتم التأكيد هنا على أهمية الجودة الاستهلاكية. يجب أن تكون المواد الاستهلاكية qPCR خالية من الملوثات والمثبطات. الضغط العالي والإشعاع يزيلان البكتيريا و DNases ، ولكن ليس الغبار وبقايا الحمض النووي ، والتي قد تمنع تفاعلات تفاعل البوليميراز المتسلسل أو تنتج تضخيمًا غير محدد. المواد لها امتصاص ، وحتى الملوثات الصغيرة سوف تمتص التألق في نظام التفاعل وتؤثر على تجميع إشارات التألق. تم استخدام نسخة مبالغ فيها من التجربة لإثبات تأثير تلوث الشوائب على التجربة. كما هو مبين في الشكل أدناه ، تم وضع شوائب في أحد آبار التفاعل بالأوكتاف. كما هو متوقع ، أظهرت منحنيات التضخيم شذوذًا ملحوظًا.
الشوائب في أنابيب تفاعل PCR
الشوائب في أنبوب التفاعل
8 شرائط
نتيجة التفاعل المتكرر لـ 8 أنابيب ، "تنحرف" شوائب البئر الأيسر المنحنى.
تذكير: احرص على عدم تعريض المواد الاستهلاكية للهواء لفترة طويلة. بعد إخراج المواد الاستهلاكية ، تأكد من إغلاق كيس التغليف بسرعة لتجنب لمسه بيديك. إذا أمكن ، اعمل على مقعد نظيف.
4. السعة / الحجم / الجريان
يحدد الحجم مقدار العينة (حجم التفاعل) التي يمكن تحميلها. قد تؤدي الجرعات الزائدة إلى انخفاض كفاءة نقل الحرارة أو الانسكاب أو التلوث المتبادل ؛ قد يؤدي نقص الجرعات إلى فقد العينة التبخرية. ستحدد كتلة التسخين الخاصة بأداة qPCR أيضًا المواد الاستهلاكية القابلة للتطبيق وحجم نظام التفاعل القابل للتطبيق. من السهل فهم الإنتاجية ، فهي الحد الأقصى لعدد العينات التي يمكن تحميلها في تجربة واحدة. السعة المشتركة ومواصفات التدفق موضحة في الجدول أدناه:
أنبوب واحد / ثمانية صفوف {{0}}. 2 مل ، 0.1 مل
{0} صفيحة البئر 0. 2 مل ، 0.1 مل
{0}} صفيحة البئر 0.2 مل
يتم أيضًا تقسيم مواصفات السعة بشكل عام إلى أنواع قياسية ومنخفضة ، كما هو موضح أدناه. المواد الاستهلاكية منخفضة الارتفاع لها ارتفاع أقل. يقلل هذا التصميم القصير المساحة الموجودة فوق نظام التفاعل ("الحجم الميت" - الجزء غير المجدي) ، ويقلل من آثار التبخر أثناء التدوير الحراري ، ويمكّن وحدة التسخين من الالتفاف حولها إلى حد أكبر لتحسين كفاءة نقل الحرارة. لذلك ، تُعرف الأنابيب منخفضة الارتفاع أيضًا باسم الأنابيب أو الألواح "السريعة".
أنبوب pcr
تذكير: حجم التفاعل الشائع الاستخدام هو 2 0 ميكرولتر ، ويوصى باستخدام أنبوب تفاعل صغير الحجم بسعة 0.1 مل أو حجم صغير.
5. سمك الجدار
يؤثر سمك جدار الأنبوب بشكل مباشر على التوصيل الحراري. يجب أن يكون لمستهلكات PCR سماكة جدار موحدة لتوفير نقل حرارة ثابت. جدار الأنبوب الرفيع للغاية أرق بنسبة 50 في المائة من الإصدار القياسي ، مما يقلل من الحاجز الحراري بشكل أكبر ويجلب تأثيرات استجابة أسرع وأفضل. لذلك ، من أجل زيادة كفاءة تفاعلات تفاعل البوليميراز المتسلسل (PCR) وضمان تفاعلات مستقرة وفعالة ، فإن مستهلكات PCR الموحدة والرقيقة للغاية هي الخيار الأفضل.
6. الشفافية
تتطلب الأغطية والأغشية المانعة للتسرب لـ qPCR وضوحًا بصريًا عاليًا لضمان الاختراق الأمثل ونقل إشارات الفلورسنت مع تقليل التشوه (لأجهزة qPCR عالية القراءة). كلما زادت شفافية جدار الأنبوب ، فقد يؤثر ذلك على نتائج التجربة. تم شرح السبب أعلاه. يمكن أن يتجاهل PCR التقليدي هذه الميزة.
7. التنانير
تشير حافة لوحة PCR إلى الامتداد المحيطي للوحة. عند بناء أنظمة تفاعل ، تعمل الحواف كدعم مستقر لعمليات سحب العينات وتوفر القوة الميكانيكية والتماسك عند دمجها مع محطات العمل الآلية. هناك ثلاثة أنواع شائعة من التنانير ونصف التنانير والتنانير الكاملة (المقابلة لـ A و B و C في الشكل أدناه).
بدون تنورة: يمكن استخدامه مع معظم أدوات PCR أو qPCR ، ولكن ليس للتطبيقات الآلية. سهلة النقل أثناء سحب العينة ، وليست مستقرة جدًا ، ويجب استخدامها مع حامل اللوحة.
التنانير النصفية: مثالية للتطبيقات الآلية مع ثبات جيد لسحب العينات.
لوحة التنورة الكاملة: مثالية للتطبيقات الآلية. قوة ميكانيكية جيدة ، ومناسبة لأجهزة PCR مع وحدات بارزة ، وثبات عالي أثناء المص.
لوحة pcr
نصائح: تكمن أهمية التنورة في تسهيل التصنيع والمعالجة الآلية للدفعات ، جنبًا إلى جنب مع الذراع الآلية. قد لا تكون هناك حاجة إليه في مختبرات البحث التقليدية ، ولا يكفي التنورة.
لوحة pcr
8. بارافيلم
فيلم ختم لوحة PCR مصنوع من البلاستيك الشفاف أو رقائق الألومنيوم. تعتبر الأفلام اللاصقة الشفافة أكثر شيوعًا ، وهي مناسبة لـ 96 أو 384 لوحًا جيدًا ، ويجب أن يكون لها نفاذية كافية للضوء. عند إغلاق الفيلم ، سيتم استخدام بطاقة صغيرة للضغط على الفيلم حول فتحة الختم لتجنب تسرب الهواء.
قد تكون أفلام الألمنيوم اللاصقة أقل شيوعًا. على الرغم من أنها ليست مناسبة لـ qPCR ، إلا أنها مثالية للاستهلاك للعينات الحساسة للضوء. نظرًا لأنه يمكن ثقبه ، فإنه يسهل نقل العينة في PCR (من أجل PCR التقليدي).
فيلم ختم لوحة PCR
لخص
بصفتها الناقل لنظام PCR ، تعد المواد الاستهلاكية مهمة جدًا لتحسين جودة البيانات التجريبية. آمل أن تساعدك هذه المشاركة في فهم بعض النصائح حول المواد الاستهلاكية PCR وتقديم المساعدة لاختيار أفضل للمواد الاستهلاكية.
