تُستخدم لوحات زراعة الخلايا بشكل شائع والمواد الاستهلاكية المهمة في تجارب زراعة الخلايا لأنها يمكن أن توفر الوقت ومواد الكاشف لتجارب الخلايا ، ويمكنها إعداد متغيرات ديناميكية متعددة في نفس الوقت لتسهيل المراقبة والكشف.
لوحة الثقافة
1. أغطية 96 ، 24- أطباق زرع الآبار أو أطباق بتري فضفاضة جدًا ، وهي ملائمة للتهوية ، ولكن هل تنزلق البكتيريا والعفن والملوثات الأخرى؟
الجواب: (1) الغطاء فضفاض للغاية وينتمي إلى ثقافة شبه مفتوحة. والغرض من ذلك هو التنفس (في الواقع ، لتمكين تبادل ثاني أكسيد الكربون خارج طبق الثقافة بالكامل مع طبق الثقافة للحفاظ على قيمة الرقم الهيدروجيني للوسط).
(2) هناك مزايا وعيوب تزيد من احتمالية التلوث. بالإضافة إلى ذلك ، يتسبب هذا في تبخر السائل الموجود في طبق بتري ، وهو ما يُعرف بجرعات الأدوية بدقة. لذلك فإن الإجراءين التاليين ضروريان:
أ) يجب أن يكون الهواء في الحاضنة نظيفًا (الأشعة فوق البنفسجية العادية ، وتنظيف الكحول ، ويجب تشغيل وإيقاف الحاضنة بأقل قدر ممكن)
ب) يجب الحفاظ على نسبة الرطوبة في الحاضنة بنسبة 100 في المائة في جميع الأوقات (حوض يوضع فيه الماء المقطر المعقم في الحاضنة). انتبه لعملية التعقيم!
2. يتم تلقيح خلاياي على لوحة المزرعة ، وتتجمع الخلايا دائمًا في الجزء المحيطي. ماذا علي أن أفعل؟ أرى أن زنازين بعض رفاق السلاح تتجمع في المنتصف. هل هي مشكلة في جودة اللوحة؟
ج: كيف تمزج خلاياك؟ هل هي تهب الماصة أم تهتز لوحة الثقافة؟ إذا كان هذا هو الأخير ، وتم اهتزازه في دائرة ، فمن المحتمل جدًا أن يتم إلقاء الخلايا في الجزء المحيط بسبب قوة الطرد المركزي ، مما يؤدي إلى منتصف الخلايا. أقل من أربعة أسابيع! يمكنك أن تجرب ذلك بنفسك!
طريقة جيدة: قبل أن تزرع صفيحة البذور ، ضع لوحة المزرعة في الحاضنة لبضع ساعات من التشبع ثم أخرجها. عند زرع الخلايا ، يجب أن تكون القوة خفيفة. يمكنك استخدام المنقط على جانب ثقب لوحة الثقافة ببطء إضافة للسماح بتدفق تعليق الخلية في آبار اللوحة ، وتنمو الخلايا المستنبتة بشكل موحد بشكل كبير. تذكر ألا تهز المذبذب أبدًا وإلا ستتجمع خلاياك معًا كما قلت.
3. يتم تمرير خلاياي بشكل طبيعي ، ولكن عندما ينتقل نوع واحد إلى صفيحة من ستة آبار (بغض النظر عن إضافة الدواء والتحكم فيه) ، هناك دائمًا خليتان أو ثلاث بئرين (عشوائي) لا تنمو بشكل جيد ، وتكون صغيرة ، ويبدو أنها لا تنمو بشكل جيد. لا بد من كسرها. هل واجه أحد هذا؟ ماهو السبب؟
ج: قد يكون مرتبطًا بدرجة حرارة السائل الذي تضيفه. إذا تم إخراج خلاياك للتو لتغيير الوسط وإضافة الوسيط ، وتم إخراج الوسيط أيضًا من الثلاجة ذات 4 درجات قريبًا ، فمن السهل على الخلايا أن تتجمد حتى الموت. يوصى باحتضان الوسيط في الحاضنة لمدة 15 دقيقة أولاً.
بالإضافة إلى ذلك ، يرتبط أيضًا بحالة نمو خلاياك. يمكن تحضين الخلايا قبل الجرعات بتركيزات مصل عالية. تأكد من أن الخلايا في حالة جيدة.
أو يمكن تحضينها في حمام مائي بدرجة 37- ، أو مشكلة لوحة الثقافة نفسها ، يمكنك تجربة لوحة ثقافة أخرى. الاحتمال الآخر هو مشكلة حالة الخلية ، اضبط تركيز المصل عند بذر اللوحة.
4. في الأيام الأخيرة ، استخدمت لوحة استنبات من ستة آبار لتلقيح الخلايا. بعد الزراعة لمدة 24 ساعة ، قمت بتغيير الوسيلة. قبل تغيير الوسيط ، لاحظت أن الخلايا ملتصقة بالجدار ، والحالة جيدة جدًا. بعد تغيير الوسيط ، استخدمت المجهر على الفور. لوحظ أن ما يقرب من نصف الخلايا في كل بئر أظهرت حالة الاقتراب من الموت. تصبح الخلايا صغيرة جدًا وتنتج الكثير من الحطام ، بينما النصف الآخر من الخلايا طبيعي ، هناك نقطة فاصلة بين الخلايا غير الطبيعية والخلايا الطبيعية ، والنصف العلوي جيد ، والنصف السفلي ليس جيدًا ، فكيف يكون هذا؟ ماذا جرى؟
ج: يمكنك معرفة ما إذا كان هناك أي من الأسباب التالية
أ. لا يتم وضع لوحة الثقافة أفقيًا ؛
ب. ماذا عن وسط الثقافة الخاص بك ، إذا انتهت صلاحية وسيط الثقافة ، فلن تلتزم الخلايا. جرب وسطًا طازجًا
ج. قد تكون مشكلة اللوحة. لا توجد مشكلة في تغيير لوحة ماركة أخرى أو استخدام زجاجة الثقافة.
د. هل انتبهت لتأثير المروحة عند تغيير الوسط ، خاصة عندما يكون هناك العديد من ألواح الاستنبات التي تحتاج إلى الاستبدال ، فمن السهل أن تتسبب في انكماش الخلايا وتمزقها بسبب الرياح وفقدان المياه. إذا كان الأمر كذلك ، يجب تغيير الوسيط واحدًا تلو الآخر ، ولا تخف من إضاعة الماصة ، انتبه إلى كفاءة العملية!
5. لقد مرت أربعة أيام منذ أن تم هضم الخلايا وتلقيحها في 24- لوحة بئر ، وكان الجزء الأوسط من كل بئر ممتلئًا دائمًا. تم غسل الوسيط باستخدام برنامج تلفزيوني كل يوم ، وحدث نفس الموقف عندما تم تغيير الوسيط في اليوم التالي. هل الحواف طويلة والمركز مليء بالخلايا الميتة؟
الجواب: إذا كانت الخلايا كثيفة حولها ومتناثرة في الوسط ، فهناك ما يقرب من الأسباب التالية:
تمت إضافة الوسيط قليلًا جدًا. بشكل رئيسي بسبب مشكلة التوتر السائل.
ما إذا كان هناك ماء أقل في قاع الحاضنة ؛
كان الاهتزاز بعد بذر الخلية أكثر من اللازم. يتم توزيع الخلايا حولها بسبب قوة الطرد المركزي.
المفتاح لمعرفة ما إذا كانت الخلايا موزعة بالتساوي هو أن كل نوع من الخلايا له اختلافات فردية ، وقد لا تكون العمليات الخلوية للأشخاص الآخرين مناسبة لك. لذلك عليك أن تستكشف بنفسك وتجد مجموعة من القواعد الفريدة لخلاياك. لديك الخبرة التالية:
(1) يجب خلط جميع المعلقات الخلوية المراد بذرها مع ماصة قبل البذر.
(2) وفقًا للسجلات ، فإن حجم السائل في لوحة البئر 24- هو 1 مل ، في الواقع ، حجم 1 مل كافٍ.
(3) عند التلقيح ، أضف العينة ببطء ، وتذكر أن تقوم بتدوير طرف الماصة قليلاً. لا يمكن إضافة العينة بسرعة كبيرة لتجنب تراكم الخلايا عند نقطة إضافة عينة واحدة ، والاهتمام بإضافة عينات في أجزاء مختلفة ، أي أثناء إضافة المسدس المتحرك. الرأس ، تجعل الخلايا تميل بشكل مصطنع إلى أن تكون موزعة بالتساوي. يؤدي القيام بذلك إلى توزيع الخلايا بالتساوي.