بالنسبة لأطباق بتري ذات القاعدة الزجاجية الشائعة في السوق ، عادة ما يتم عمل ثقب في الجزء السفلي من طبق بتري بلاستيكي ، ثم يتم لصق غطاء زجاجي أو شريحة خلية بسمك 170-220 ميكرومتر على الجزء السفلي من طبق بتري بغراء بدون ظل أو هلام السيليكا. ليس قاع طبق بتري مصنوع بالكامل من الزجاج. المنطقة المناسبة للمراقبة هي فقط في منطقة الثقب. ومع ذلك ، بسبب كره الزجاج للماء ، عند استنبات الخلايا ، لا يمكن للخلايا أن تلتصق بالزجاج جيدًا ، وحالة النمو ليست جيدة ، وحتى ظاهرة تفريغ الخلايا تحدث أثناء التصوير بالمسح البؤري.
لكي تلتصق الخلايا جيدًا ، من الضروري التأكد من أن كواشف بروتينية محددة قد تم تغليفها قبل استخدام أطباق ذات قاع زجاجي لزراعة الخلايا.
افعل ذلك بنفسك لحاف
تتطلب ثقافات الخلايا المختلفة كواشف طلاء مختلفة. في الوقت نفسه ، نظرًا لأن البروتين المستخدم في الطلاء هو منتج بيولوجي ، فإن نقاء المنتج وجرعة بروتين الطلاء لشركات مختلفة مختلفة. هذا المنشور الفني هو للاشارة فقط. يجب أن تشير الجرعة المحددة من كواشف الطلاء إلى تعليمات العلامات التجارية المستخدمة. . ومن الأفضل إجراء تجربة التدرج باستخدام الكواشف التي تستخدمها للعثور على أنسب تركيز للطلاء.
فيما يلي مثال على Poly-L-Lysine (PLL، sigma، P4832، 100ug / ml):
يعد طلاء PLL مناسبًا للغالبية العظمى من الخلايا ، خاصةً لاستنبات الخلايا العصبية في النظام المركزي. من الضروري عمل محتوى البروتين (ميكروغرام / سم 2) لكل وحدة مساحة للوصول إلى الكمية المطلوبة أثناء الاستخدام. كمية الطلاء الموصى بها لـ PLL في هذا المثال هي 2 ميكروغرام / سم 2. من الضروري حساب كمية البروتين المطلوبة وفقًا لمساحة الطلاء وحجم الطلاء.
على سبيل المثال: طبق بتري بقاع زجاجي 35 مم ، مساحة نمو الخلية 3.5 سم 2 ، مساحة الطلاء 4.1 سم 2 ، وحجم محلول الطلاء هو 400 ميول ، ثم الجرعة الموصى بها هي 2 ميكروغرام / سم 2. ثم هناك حاجة إلى 8.2 ميكروغرام من PLL في بئر واحد. إذا تمت إضافة 400 ميكرولتر من محلول PLL فقط ، يكون تركيز محلول PLL 20.5 ميكروغرام / مل (حوالي 20 ميكروغرام / مل). لذلك ، يجب تخفيف محلول المخزون بالماء عالى النقاء.
خطوات محددة:
1. تمييع محلول مخزون PLL 1: 5 بالماء عالى النقاء.
2. أضف 400 مايكرولتر من التخفيف PLL إلى كل طبق بتري بقاع زجاجي 35 مم.
3. احتضان لمدة 1-2 ساعة في درجة حرارة الغرفة ونضح التخفيف PLL.
4. اغسل بعناية 3 مرات باستخدام 2 مل من محلول PBS أو وسط خالٍ من المصل ، ثم اسحب محلول الغسيل.
5. أضف تعليق الخلية مباشرة للزراعة.
تقييم الطريقة
نظرًا للخصائص المختلفة لبروتينات الطلاء المختلفة ، يتم استخدام بروتينات طلاء مختلفة بطرق مختلفة. غالبًا ما يتم إنشاء تلوث جديد بسبب الحاجة إلى طلاء الأطباق ذات القاع الزجاجي. علاوة على ذلك ، غالبًا ما يتم اكتشاف التلوث بعد رفع الخلايا ، مما لا يؤخر الوقت فحسب ، بل يؤدي أيضًا إلى إهدار المواد الاستهلاكية. بعد كل شيء ، الكواشف البروتينية المغلفة والأطباق ذات القاع الزجاجي المضمونة الجودة باهظة الثمن (قد تتسرب الأطباق ذات القاع الزجاجي ذات الجودة الرديئة لأن الغراء ليس لزجًا أو أن الغراء المستخدم سام للخلايا).
أطباق بتري متحد البؤر بدون طلاء
بالنسبة للأطفال الذين يرغبون في توفير الوقت والجهد ، فمن الأنسب استخدام أطباق الثقافة البؤرية بدون طلاء.
العوامل التي يجب مراعاتها عند اختيار طبق الثقافة المناسب هي: ما إذا كان مناسبًا لخلاياك الخاصة للالتزام بها ، وما إذا كانت الخصائص البصرية لطبق الثقافة تفي بالمتطلبات البؤرية.
لا تقتصر أطباق بتري التي تلبي متطلبات العوامل المذكورة أعلاه على الأطباق ذات القاعدة الزجاجية المطلية. في الواقع ، يعلم الجميع أن الأطباق البلاستيكية أرخص وأسهل على الخلايا الالتصاق بها من الزجاج. فيما يلي مثال على طبق ثقافة متحد البؤر من Shanghai Jingan ، للحديث عن المعلمات التي يحتاجها طبق الثقافة المناسب للتجارب البؤرية:
يمكن ملاحظة أن المعلمات الفيزيائية لأطباق الثقافة البؤرية التي تلبي متطلبات الاستخدام المباشر قريبة جدًا من الزجاج ، ولكن في نفس الوقت ، لها أيضًا خصائص محبة للماء ، والتي يمكن أن تجعل معظم الخلايا تلتصق بشكل أفضل ؛ والليونة أفضل من الزجاج. يسمح لمعظم خطوط الخلايا والخلايا الأولية بالالتصاق مباشرة بالجدار ، وهو ليس هشًا ، وهو اختيار جيد.
يمكنك أيضًا العثور على طبق الثقافة البؤرية الأنسب لتجربتك وفقًا لمتطلباتك التجريبية المحددة والمعلمات في الجدول أعلاه.
تقييم الطريقة
لا يتطلب اختيار هذا النوع من أطباق بتري طلاءًا إضافيًا ، مما يقلل بشكل كبير من خطر التلوث. ونظرًا لأنه من الأسهل التعامل مع الجزء السفلي من البلاستيك ، فلا حاجة إلى غراء لتثبيته في قاع طبق بتري. القضاء على إمكانية التسرب أو السمية الخلوية.
