عملية زراعة خلايا الثدييات
تمر خلايا الثدييات بعملية استخراج الأنسجة ، والثقافة الأولية ، والثقافة الفرعية. يمكن تقسيم الثقافة الفرعية إلى ثقافة خط الخلية وثقافة خط الخلية وفقًا للظروف. يتم وصف كل عملية بإيجاز على النحو التالي:
الثقافة الأولية: بعد إزالة الأنسجة من الحيوان ، يتم فرمها ومعالجتها بأنزيمات مختلفة (عادةً التربسين) وعوامل مخلبية (عادةً EDTA) والطرق الميكانيكية (الشفط المتكرر ونفخ الماصة) ، ثم يتم تفريقها في خلايا فردية ، ويتم زراعتها في وسيط مناسب يمكّن الخلايا من البقاء والنمو والتكاثر. تشير زراعة الخلايا الأولية عمومًا إلى زراعة الخلايا في غضون 10 ممرات بعد إزالة الخلايا من الحيوان.
بعد زراعة الخلايا الأولية وانقسام الخلايا والتكاثر ، تزداد الثقافة تدريجيًا ، ويملأ النمو مساحة الثقافة ، ثم تتواصل مع بعضها البعض ، مما يؤدي إلى تثبيط التلامس ، ويتباطأ معدل النمو تدريجيًا أو حتى يتوقف. يجب إعادة زرعها في قوارير استزراع جديدة للثقافة الفرعية.
المرور (الممر): يتم إخراج الخلايا الأولية من دورق الثقافة ، ويتم تحضير معلق الخلية ، وتقسيمها إلى قوارير استزراع أو أكثر لمزيد من الثقافة ، وهو ما يسمى الثقافة الفرعية.
خط الخلية: خط الخلية هو خط خلية بعد المقطع الأول في الثقافة الأولية. إذا كان وقت بقاء خط الخلية محدودًا ، فيُطلق عليه خط الخلية المنتهي. يسمى خط الخلية الذي يكتسب قدرة إنجابية غير محدودة ويستمر في البقاء بخط الخلية المستمر أو خط الخلية اللانهائي.
خط الخلية: من خطوط الخلايا المحددة بيولوجيًا ، تسمى مجموعة الخلايا المكونة من عزل الخلية المفردة أو الثقافة أو الفحص بخط الخلية. ثم يتم عزل مجموعات الخلايا ذات الأشكال المختلفة واستزراعها من خط الخلية الأساسي لتشكيل نسائل فرعية.
ظروف زراعة خلايا الثدييات
تتطلب خلايا الثدييات المختلفة شروط الاستزراع الأساسية في كل مرحلة
1. بيئة معقمة وغير سامة: المعالجة المعقمة لوسط الاستزراع وجميع معدات الاستزراع ؛ إضافة المضادات الحيوية إلى وسط الاستزراع لمنع التلوث أثناء عملية الاستزراع ؛ الاستبدال المنتظم لوسط المزرعة لإزالة المستقلبات لمنع تلف الخلايا المستنبتة.
2. التغذية: يحتوي الوسط الاصطناعي السائل على السكريات والأحماض الأمينية وعوامل تعزيز النمو والمياه والأملاح غير العضوية والعناصر النزرة وما إلى ذلك. وعادة ما يكون من الضروري إضافة مكونات طبيعية مثل البلازما والمصل
3. درجة الحرارة المناسبة وقيمة الأس الهيدروجيني: درجة الحرارة المثلى للخلايا البشرية والثديية هي 36 ± 0 5 درجات. قيمة الأس الهيدروجيني المناسبة هي 7. 2-7 .4.
4. بيئة الغاز: بيئة الغاز بشكل عام عبارة عن غاز مختلط "95 بالمائة هواء زائد 5 بالمائة ثاني أكسيد الكربون". الأكسجين غاز ضروري لعملية التمثيل الغذائي الخلوي ، ويحافظ ثاني أكسيد الكربون على الرقم الهيدروجيني للوسط.